Los problemas y soluciones comunes en el proceso de síntesis de péptidos incluyen los siguientes aspectos:
Contenido de péptidos: el contenido de péptidos se refiere al porcentaje de sustancias peptídicas en una muestra en relación con sustancias no peptídicas. En los productos peptídicos, además del péptido en sí, también se incluyen componentes no salinos introducidos durante el proceso de producción, como agua, disolventes absorbidos, iones de coordinación y sales.
Estabilidad química:
Reacción de desamidación: los residuos de Asn/Gln se hidrolizan fácilmente para formar Asp/Glu.
Hidrólisis: Los enlaces peptídicos en los péptidos se rompen fácilmente mediante hidrólisis, especialmente aquellos formados por la participación de Asp, especialmente los enlaces peptídicos Asp Pro y Asp Gly.
Reacción de racemización: todos los residuos de aminoácidos, excepto Gly, tienen átomos de carbono alfa quirales y son propensos a la reacción de racemización bajo catálisis alcalina. Los residuos de Asp son más propensos a reacciones de racemización.
- degradación por eliminación: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr y otros residuos pueden degradarse mediante - eliminación, que es más probable que ocurra a pH alcalino y se ve afectada por la temperatura y los iones metálicos.
Estabilidad física:
Desnaturalización, adsorción, agregación o precipitación: La desnaturalización de los péptidos suele estar relacionada con la destrucción de las estructuras terciarias y secundarias. En estado desnaturalizado, los péptidos son más propensos a reacciones químicas y su actividad es difícil de recuperar. El intermedio formado durante el proceso de desnaturalización tiene baja solubilidad y es propenso a la agregación y precipitación.
preservación:
Mejores condiciones de almacenamiento: los péptidos generalmente se almacenan en forma de polvo liofilizado, que es muy estable a -20 grados, especialmente después de la liofilización y se almacena en una secadora de -20 grados. La mayoría de los péptidos pueden almacenarse a esta temperatura durante varios años sin cambios. Para reducir el impacto de la humedad, los péptidos liofilizados deben restaurarse a temperatura ambiente en condiciones secas antes de exponerlos al aire.
Embalaje: Hesheng Biotechnology recomienda embalajes pequeños para evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación, reducir el número de aperturas y cierres de contenedores, reduciendo así las posibilidades de manipulación inadecuada o contaminación bacteriana, y garantizando la estabilidad de los péptidos.
Pruebas de pureza:
Garantía de pureza: todos los péptidos entregados han alcanzado la pureza requerida y los péptidos que no cumplan con el estándar serán descartados. Los resultados de la detección por HPLC y MS pueden verificar la pureza y el peso molecular del péptido, al tiempo que muestran las principales impurezas.
Otros métodos de detección, como el análisis de aminoácidos o el análisis elemental, pueden confirmar la composición de aminoácidos de los péptidos como medio complementario de confirmación de péptidos.
Tecnología de síntesis:
Síntesis de péptidos en fase sólida: la síntesis de péptidos en fase sólida no requiere purificación de productos intermedios, lo que permite procesos de síntesis continuos y sienta las bases para la automatización de la síntesis de péptidos. Basado en la síntesis química de Fmoc, el péptido objetivo se sintetizó uniendo covalentemente el grupo carboxilo del aminoácido C-terminal con una resina polimérica insoluble y luego partiendo del grupo amino del aminoácido.
El contenido anterior resume los problemas y contramedidas comunes en la síntesis de péptidos, cubriendo múltiples aspectos como la estabilidad química, la estabilidad física, las condiciones de almacenamiento, las pruebas de pureza, etc.