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Preguntas frecuentes
¿Qué metodologías de síntesis utiliza Biorunstar para la síntesis de péptidos?
RE: Biorunstar ha desarrollado diferentes metodologías de síntesis en fase de solución para satisfacer los requisitos de los clientes. Generalmente se aplica la química Fmoc en fase sólida.
¿Cómo se envían los péptidos? ¿Qué datos de control de calidad se proporcionarán?
RE: Todos los péptidos se enviarán por DHL o FedEx express como polvo liofilizado en viales individuales bien etiquetados, a temperatura ambiente. Con la excepción de los péptidos crudos, que solo se verificarán mediante espectrometría MALDI-MASS, todos los péptidos sintéticos purificados vienen con un informe del proyecto (CoA), datos de MS y datos de HPLC. Se proporcionarán hojas de datos que contienen las características clave, como la secuencia de péptidos, la pureza, la cantidad, la modificación, los datos del espectro de masas y los datos de HPLC.
¿Cuál es el tiempo de respuesta típico para la síntesis de péptidos? ¿Cuánto tiempo me lleva el envío?
RE: Nuestro tiempo de respuesta típico es de 2-3 semanas para un péptido estándar de menos de 30 aminoácidos. El tiempo de respuesta varía dependiendo de la longitud, cantidad, solubilidad y dificultad del péptido. Normalmente 3-5 días para llegar a investigadores de otros países.
¿Cuánto tiempo puedes sintetizar?
RE: Biorunstar tiene amplia experiencia en la síntesis de péptidos largos, hasta 130aa. A diferencia de muchos proveedores de péptidos que solo se sienten cómodos fabricando péptidos de menos de 30 o 40 aa, Biorunstar tiene buena experiencia en la fabricación de péptidos que van desde 40 aa a 90 aa. Es difícil sintetizar péptidos largos, especialmente de 100 aa o más. Si planea sintetizar una secuencia de 130 aa o más, contáctenos para obtener un servicio personalizado de purificación y expresión de proteínas.
¿Qué pasa si surgen algunos problemas durante el proceso de síntesis o purificación?
RE: Cada péptido tiene sus características específicas. Si ocurren algunos problemas durante la síntesis más allá de nuestras expectativas y no podemos entregar su péptido a tiempo, le informaremos lo antes posible. En caso de que no podamos producir el péptido, no se le cobrará ningún costo.
Forma de sal de TFA, forma de sal de acetato o HCl: ¿Qué forma debo elegir?
Por defecto, los péptidos se sintetizan en la sal TFA. Para experimentos relacionados con cultivos de células o tejidos, debe considerar producir péptidos en forma de acetato o sal de HCl al 98% o más para evitar respuestas anormales. Se puede solicitar en forma de sal de acetato o HCl por un costo adicional.
¿Cuál es la vida útil de un péptido?
RE: Los péptidos son estables durante un mínimo de un año si se almacenan liofilizados en el congelador. Si los péptidos se disuelven, la vida útil podría reducirse. Si los péptidos contienen varios aminoácidos reactivos que pueden oxidarse como Trp, Met pero especialmente Cys, la vida útil también podría reducirse.
El péptido contiene varias cisteínas y, por tanto, puede formar fácilmente enlaces disulfuro. ¿Cómo evito esto?
RE: Si la secuencia peptídica contiene varias cisteínas u otros aminoácidos reactivos que se oxidan fácilmente, Biorunstar ofrece entregar el péptido con trazas del fuerte reductor DTT. El péptido solo se entrega con TDT si el cliente lo permite específicamente.
¿Cómo almaceno mis péptidos sintéticos?
RE: La mayoría de los péptidos liofilizados serán estables a temperatura ambiente durante 2-3 semanas. Para el almacenamiento a largo plazo, debe almacenar los péptidos liofilizados a -20 grado. Deben evitarse ciclos repetidos de congelación y descongelación. Deje que alcance la temperatura ambiente antes de abrir. La vida útil de las soluciones peptídicas es limitada; una solución peptídica una vez preparada debe utilizarse lo antes posible.
¿Cuál es la pureza del péptido crudo y del péptido desalado? ¿Cómo se purifica el péptido? ¿Cuáles son las impurezas?
RE: Para péptidos cortos con secuencias normales menores de 15aa, generalmente es 40-60% por HPLC para grado crudo; 50-70% por HPLC para grado desalado. Cuanto más largo sea el péptido, menor será la pureza del crudo o desalado. Los péptidos generalmente se purifican mediante HPLC usando agua y un gradiente de acetonitrilo. La mayoría de las impurezas son fragmentos o péptidos de deleción, péptidos desprotegidos de forma incompleta y sal y agua residuales.
Explicación de la pureza del péptido mediante HPLC, contenido total de péptidos y contenido de péptido objetivo.
RE: Biorunstar envía péptidos según el peso bruto del polvo liofilizado. El polvo liofilizado incluye impurezas tales como fragmentos o péptidos de deleción, péptidos desprotegidos de forma incompleta, TFA y agua residual. La pureza del péptido se mide mediante HPLC. Es la cantidad de péptido correcto en relación con todos los analitos que se absorben a ~214 nm (el enlace peptídico absorbe), muy probablemente deleción, truncamiento o secuencias desprotegidas de forma incompleta, etc. La pureza del péptido mediante HPLC no tiene en cuenta el agua ni las sales. que suelen estar presentes en la muestra. El contenido total de péptidos es el porcentaje de péptidos totales presentes en relación con todo lo presente en el polvo de péptido liofilizado. El contenido total de péptidos se determina mediante análisis del contenido de nitrógeno. Por lo tanto, el contenido de péptido objetivo en el polvo de péptido liofilizado se puede concluir mediante la fórmula: Contenido total de péptido x Pureza de péptido por HPLC.
¿Cuál es el método de etiquetado con fluoresceína?
RE: FITC (isotiocianato de fluoresceína) es el precursor activado utilizado para el marcaje de fluoresceína. Para el etiquetado Nterminal eficiente, un aminohexanoilo de siete átomos
Se inserta un espaciador (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) entre el fluoróforo (fluorosceína) y el Extremo N del péptido. Este espaciador ayuda a separar el fluoróforo de su punto de unión, lo que reduce potencialmente la interacción del fluoróforo con la biomolécula a la que está conjugado y lo hace más accesible a los reactivos de detección secundaria.
Se inserta un espaciador (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) entre el fluoróforo (fluorosceína) y el Extremo N del péptido. Este espaciador ayuda a separar el fluoróforo de su punto de unión, lo que reduce potencialmente la interacción del fluoróforo con la biomolécula a la que está conjugado y lo hace más accesible a los reactivos de detección secundaria.
¿Es posible el etiquetado C-terminal de biotina (o FITC)?
RE: Sí. El marcaje C-terminal de biotina (o FITC) se realiza mediante la adición de un residuo de lisina en el extremo C-terminal de un péptido, y la biotina (o FITC) se une a la cadena lateral de lisina mediante un enlace amida. Se elimina la carga positiva de la lisina.
¿Cuál es la longitud apropiada del péptido para la producción de anticuerpos?
RE: Generalmente, se recomienda un péptido residual 10-25. Un péptido más largo podría tener más epítopos, pero también podría tener una mayor probabilidad de formar estructuras secundarias estables que no sean formas nativas. Un péptido más corto (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
¿Qué es un MAPA?
RE: MAPS o péptido multiantigénico es un péptido ramificado en el que las cadenas peptídicas lineales están unidas en su extremo C a través de un núcleo de polilisina, aumentando así el tamaño de la molécula completa. Esto se hace para eliminar el acoplamiento de péptidos a KLH. Parece que, sin embargo, la conformación de los péptidos en MAP es menos flexible y los anticuerpos obtenidos mediante MAP normalmente reconocen la proteína diana con menos frecuencia que mediante la conjugación KLH convencional. Además, no se produce ningún péptido libre al fabricar MAPS, lo que dificulta la eliminación de los anticuerpos dirigidos al núcleo de polilisina. La purificación de MAPS mediante HPLC es difícil y MAPS se proporciona sin verificación masiva debido a su heterogeneidad y su gran tamaño molecular.
¿Por qué mi solución de péptido conjugado con KLH aparece turbia?
RE: KLH o hemocianina de lapa californiana es una proteína de agregación grande (MW=4x105 – 1x107). Debido a su tamaño y estructura, su solubilidad en agua es limitada, provocando una apariencia turbia. Esto no afectará la inmunogenicidad y la solución turbia se puede utilizar para inmunizaciones.
¿Puedes explicar los picos de masa de M+Na y M+K en los espectros MALDI?
RE: Es muy común ver aductos de Na (sodio) y K (potasio) en el espectro MALDI. El sodio y el potasio provienen del agua utilizada en los disolventes peptídicos. Incluso el agua destilada y desionizada tiene trazas de iones de sodio y potasio, que nunca pueden eliminarse por completo. Estos se ionizan durante el proceso de espectrometría de masas MALDI y se unen a los grupos carboxilo libres del péptido. Debido a que no existe un sistema de purificación de agua que elimine todos los iones de sodio o potasio del agua, ver los aductos de sodio y potasio en ocasiones es muy común e inevitable en la especificación de masas MALDI. Esto no es una indicación de que el péptido no sea puro, ni debe confundirse con un peso molecular incorrecto.