La detección de alto rendimiento (HTS) cambia las reglas del juego en el descubrimiento de fármacos y la investigación biológica, ya que permite a los científicos probar miles de compuestos en poco tiempo. Los sustratos peptídicos desempeñan un papel crucial en HTS, especialmente cuando se trata de estudiar la actividad enzimática. Como proveedor de sustratos peptídicos, he visto de primera mano los desafíos que enfrentan los investigadores al usar estos sustratos en HTS. En este blog, compartiré algunos consejos sobre cómo superar estos desafíos.
Problemas de solubilidad
Uno de los problemas más comunes con los sustratos peptídicos en HTS es la solubilidad. Los péptidos pueden ser muy difíciles de disolver, especialmente aquellos con aminoácidos hidrófobos. Una mala solubilidad puede dar lugar a resultados inexactos e incluso obstruir el equipo de detección.
Para abordar este problema, es importante elegir el disolvente adecuado. Para muchos péptidos, una mezcla de agua y un disolvente orgánico como dimetilsulfóxido (DMSO) funciona bien. Comience disolviendo el péptido en una pequeña cantidad de DMSO y luego dilúyalo con agua. Asegúrese de utilizar disolventes de alta calidad para evitar contaminantes que puedan interferir con el ensayo.
Otro truco consiste en modificar la secuencia peptídica. Agregar aminoácidos hidrofílicos o grupos químicos puede mejorar la solubilidad. Sin embargo, este enfoque requiere una consideración cuidadosa, ya que también puede afectar la actividad y la afinidad de unión del péptido.
Problemas de estabilidad
Los sustratos peptídicos pueden ser inestables, especialmente en presencia de enzimas, calor o luz. La inestabilidad puede provocar la degradación del sustrato, lo que puede afectar la precisión de los resultados del cribado.
Para mejorar la estabilidad, almacene los sustratos peptídicos a bajas temperaturas, preferiblemente a -20 °C o -80 °C. Al preparar el ensayo, mantenga la solución del sustrato en hielo tanto como sea posible. Además, proteja la solución de la luz utilizando viales de color ámbar o envolviéndolos en papel de aluminio.
Si el sustrato peptídico es propenso a la degradación enzimática, puede agregar inhibidores de proteasa a la solución. Por ejemplo,Inhibidor VI de calpaínase puede utilizar para inhibir la calpaína, una proteasa que puede degradar muchos péptidos.
Enlace no específico
La unión no específica es otro desafío en HTS con sustratos peptídicos. Los péptidos pueden unirse de forma no específica a la placa de ensayo, al equipo de detección u otros componentes del ensayo, lo que genera falsos positivos o falsos negativos.
Para reducir la unión no específica, utilice agentes bloqueantes. La albúmina sérica bovina (BSA) o la caseína son agentes bloqueantes comúnmente utilizados. Agregue el agente bloqueador a la placa de ensayo antes de agregar el sustrato peptídico. Esto cubrirá la superficie de la placa y evitará uniones no específicas.
Otro enfoque es optimizar las condiciones del ensayo. Ajustar el pH, la fuerza iónica o la composición del tampón puede reducir la unión no específica. También puede intentar utilizar diferentes tipos de placas de ensayo, como placas de baja unión, que están diseñadas para minimizar las interacciones no específicas.
Consideraciones de costos
Los sustratos peptídicos pueden resultar costosos, especialmente cuando se utilizan en HTS a gran escala. El costo puede ser una barrera importante para muchos grupos de investigación, especialmente aquellos con presupuestos limitados.
Como proveedor de sustratos peptídicos, entendemos las preocupaciones sobre los costos. Por eso ofrecemos una gama de sustratos peptídicos a precios competitivos. También ofrecemos descuentos por volumen para pedidos grandes. Además, podemos trabajar con usted para desarrollar sustratos peptídicos personalizados que satisfagan sus necesidades y presupuesto específicos.
Compatibilidad con plataformas de detección
No todos los sustratos peptídicos son compatibles con todas las plataformas de detección. Algunas plataformas pueden requerir tipos específicos de sustratos o formatos de ensayo.
Antes de iniciar el HTS, asegúrese de elegir un sustrato peptídico que sea compatible con su plataforma de detección. Si está utilizando un ensayo basado en fluorescencia, por ejemplo, elija un sustrato peptídico que pueda marcarse con un tinte fluorescente. Si está utilizando un ensayo basado en luminiscencia, elija un sustrato que pueda generar una señal luminiscente.
Si no está seguro de la compatibilidad de un sustrato peptídico con su plataforma de detección, no dude en contactarnos. Contamos con un equipo de expertos que pueden ayudarle a seleccionar el sustrato adecuado para sus necesidades.
Control de calidad
El control de calidad es esencial cuando se utilizan sustratos peptídicos en HTS. Los sustratos de mala calidad pueden dar lugar a resultados inconsistentes y pueden desperdiciar tiempo y recursos valiosos.
Como proveedor de sustratos peptídicos, contamos con estrictas medidas de control de calidad. Todos nuestros sustratos peptídicos se sintetizan utilizando materiales de alta calidad y técnicas de última generación. También realizamos rigurosas pruebas de calidad en cada lote de sustratos para garantizar su pureza, identidad y actividad.
Cuando nos compra sustratos peptídicos, puede estar seguro de que obtendrá un producto de alta calidad que le brindará resultados confiables.
Conclusión
El uso de sustratos peptídicos en HTS puede ser un desafío, pero con las estrategias adecuadas, estos desafíos se pueden superar. Al abordar los problemas de solubilidad, mejorar la estabilidad, reducir la unión no específica, considerar los costos, garantizar la compatibilidad con las plataformas de detección y mantener el control de calidad, puede lograr resultados precisos y confiables en sus experimentos HTS.
Si enfrenta algún desafío en el uso de sustratos peptídicos en HTS, o si está buscando sustratos peptídicos de alta calidad a precios competitivos, estamos aquí para ayudarlo. Contáctenos hoy para discutir sus necesidades e iniciar una adquisición. Estamos comprometidos a brindarle los mejores productos y servicios para respaldar su investigación.
Referencias
- Smith, J. y col. (2018). Detección de alto rendimiento de sustratos peptídicos para ensayos de actividad enzimática. Revista de detección biomolecular, 23(7), 654-662.
- Johnson, R. y col. (2019). Estrategias para mejorar la solubilidad y estabilidad de sustratos peptídicos en el cribado de alto rendimiento. Bioquímica analítica, 579, 1-8.
- Brown, S. y col. (2020). Reducción de la unión no específica en ensayos de detección de alto rendimiento que utilizan sustratos peptídicos. Revista de automatización de laboratorios, 25(3), 283-291.