¡Hola, compañeros entusiastas de las células! Como proveedor de células TET - 213, he tenido una buena cantidad de experiencias que tratan con estas células únicas. En este blog, compartiré algunos consejos sobre cómo mantener la viabilidad de las células TET - 213.
En primer lugar, comprendamos qué son las células TET - 213. Son un tipo de línea celular que ha mostrado un gran potencial en diversas áreas de investigación, como los estudios de neurociencia y cáncer. Pero mantenerlos vivos y patear no siempre es un paseo por el parque.
Medio de cultivo celular
La base de mantener cualquier línea celular es el medio de cultivo correcto. Para Tet - 213 células, un medio de alta calidad es imprescindible. Por lo general, recomiendo usar un medio rico en nutrientes esenciales. El medio RPMI 1640, suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS), penicilina y estreptomicina, ha trabajado para mí. El FBS proporciona los factores de crecimiento y las hormonas que estas células necesitan para prosperar, mientras que los antibióticos ayudan a prevenir la contaminación.
Asegúrese de almacenar el medio correctamente. Manténgalo a 4 ° C y protégalo de la luz. Antes de usarlo, caliéntelo hasta 37 ° C en un baño de agua. Esto imita la temperatura corporal y es más cómodo para las células.
Condiciones de incubación
TET: 213 células son bastante exigentes sobre su entorno. Les gusta incubar a 37 ° C en una atmósfera humidificada con 5% de CO₂. Este entorno se parece mucho a las condiciones fisiológicas en el cuerpo humano.
Invierte en una buena incubadora. Debe tener una temperatura estable y control de co₂. Verifique regularmente la configuración y la calibración de la incubadora para asegurarse de que todo esté en orden. Además, limpie la incubadora regularmente para evitar la construcción de contaminantes.
Subcultivo
El subcultivo es un paso importante para mantener la viabilidad celular. Cuando las células TET - 213 alcanzan aproximadamente 80 - 90% de confluencia, es hora de dividirlas. Primero, retire el medio viejo y lave las células con solución salina tamponada (PBS) de fosfato para eliminar cualquier escombro. Luego, agregue la solución de tripsina - EDTA para separar las células del matraz de cultivo. Incubar el matraz a 37 ° C durante unos minutos hasta que las células comiencen a redondear y separar.
Una vez que las células se separen, agregue medio fresco para neutralizar la tripsina. Centrifuge la suspensión celular a baja velocidad para sedimentar las células. Resuspender el sedimento en medio fresco y transferir las células a nuevos matraces de cultivo a la densidad de siembra apropiada. Una densidad de siembra de alrededor de 5 x 10 ⁴ células/cm² generalmente funciona bien para las células TET - 213.
Monitoreo de la salud celular
Monitorear regularmente la salud de sus células TET - 213 es crucial. Use un microscopio de contraste de fase para verificar la morfología celular. Las células TET - 213 sanas deben tener una forma uniforme y estar bien unidos al matraz. Si nota algún signo de muerte celular, como células flotantes o formas de células anormales, podría ser un signo de un problema.
También puede realizar un ensayo de viabilidad, como el ensayo de exclusión de Blue Blue. Mezcle una pequeña cantidad de suspensión de su celular con azul tripano. Las células vivas excluirán el tinte, mientras que las células muertas lo tomarán y aparecerán azules. Cuente el número de células vivas y muertas usando un hemocitómetro para calcular el porcentaje de viabilidad celular.
Calidad de los reactivos
El uso de reactivos de alta calidad no es negociable. La calidad de los FBS, los antibióticos y otros aditivos puede tener un impacto significativo en la viabilidad celular. Al elegir FBS, busque un lote que haya sido probado por su capacidad para apoyar el crecimiento celular. Evite usar reactivos o reactivos vencidos que se hayan almacenado de manera incorrecta.
Algunos otros factores a considerar son los péptidos que pueden usarse junto con las células TET - 213. Por ejemplo,Proteína de melanocitos PMEL 17 (130 - 138) (humano)ha mostrado potencial en algunas investigaciones relacionadas con la señalización celular.Urechistachinin iyDinorfina A (1 - 17)También son péptidos que se pueden explorar en el contexto de la investigación de células TET - 213.
Solución de problemas
Si tiene problemas para mantener la viabilidad de sus células TET - 213, no se asuste. Aquí hay algunos problemas y soluciones comunes:
Contaminación: Si ve signos de contaminación bacteriana o fúngica, como la nubosidad en las colonias medianas o visibles, descarte los cultivos contaminados de inmediato. Limpie la incubadora y todo el equipo a fondo. Asegúrese de seguir técnicas asépticas estrictas al manejar las células.
Mal crecimiento celular: Si las células no están creciendo bien, verifique el medio de cultivo. Podría ser que el medio es viejo o que los suplementos no funcionen correctamente. Además, asegúrese de que las condiciones de incubación sean correctas. A veces, un ligero cambio en la temperatura o la concentración de CO₂ puede afectar el crecimiento celular.
Desprendimiento celular: Si las células se separan con demasiada facilidad, podría deberse a la excesiva tripsinización. Reduzca el tiempo de incubación de tripsina la próxima vez. Además, asegúrese de que la solución de tripsina - EDTA sea fresca.
En conclusión, mantener la viabilidad de las células TET - 213 requiere atención al detalle y una buena comprensión de sus necesidades. Siguiendo estos consejos, puede mantener sus células TET - 213 sanas y productivas.
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Referencias
- Freshney, RI (2016). Cultivo de las células animales: un manual de técnica básica y aplicaciones especializadas. Wiley.
- Doyle, A. y Griffiths, JB (2012). Cultivo de células y tejidos: procedimientos de laboratorio. Wiley - Blackwell.