Los ingredientes farmacéuticos activos del péptido (API) juegan un papel crucial en la medicina moderna, ofreciendo opciones de tratamiento específicas y efectivas para una amplia gama de enfermedades. Como proveedor líder de API de péptidos, entendemos la importancia de producir péptidos de alta calidad que cumplan con los estándares regulatorios más estrictos. Uno de los pasos clave en la producción de API de péptidos es la purificación, lo que garantiza la eliminación de impurezas y contaminantes para lograr el nivel deseado de pureza y calidad. En esta publicación de blog, discutiremos los pasos involucrados en la purificación de las API de péptidos.
Paso 1: Síntesis de péptidos crudos
El primer paso en la purificación de las API de los péptidos es la síntesis del péptido crudo. Esto se realiza típicamente utilizando la síntesis de péptidos de fase sólida (SPPS), un método ampliamente utilizado para la síntesis química de péptidos. En SPPS, el péptido se construye un aminoácido a la vez en un soporte sólido, generalmente una resina. Los aminoácidos están protegidos con grupos específicos para prevenir reacciones no deseadas durante el proceso de síntesis. Una vez que se ensambla la cadena peptídica, se escinde de la resina y se desprotee para obtener el péptido crudo.
Paso 2: filtración inicial
Después de la síntesis de péptidos crudos, la mezcla de reacción contiene el péptido deseado, así como diversas impurezas, como aminoácidos no reaccionados, reactivos de acoplamiento y fragmentos de resina. El primer paso de purificación es eliminar estas partículas grandes e impurezas insolubles a través de la filtración. Un proceso de filtración simple que utiliza un papel de filtro o un filtro de membrana puede eliminar efectivamente las partículas visibles, dejando una solución relativamente clara que contiene el péptido crudo.
Paso 3: cromatografía preparatoria
La cromatografía preparativa es un paso clave en la purificación de las API de los péptidos. Se utiliza para separar el péptido deseado de las impurezas restantes en función de sus diferentes propiedades físicas y químicas. Existen varios tipos de técnicas de cromatografía que pueden usarse para la purificación de péptidos, incluida la cromatografía de fase inversa (RPC), la cromatografía de intercambio iónico (IEC) y la cromatografía de tamaño-exclusión de tamaño (SEC).
- Cromatografía en fase inversa (RPC): RPC es la técnica de cromatografía más utilizada para la purificación de péptidos. Se basa en las interacciones hidrofóbicas entre el péptido y la fase estacionaria, que típicamente es una resina hidrófoba. La solución de péptido crudo se carga en la columna RPC, y los péptidos se eluyen usando un gradiente de un disolvente polar (como el agua) y un disolvente no polar (como el acetonitrilo). Los péptidos con diferentes hidrofobicidades eluirán en diferentes momentos, permitiendo su separación. Por ejemplo, un péptido comoSteer-Glu-oea-oeu-oosupuede purificarse efectivamente usando RPC.
- Cromatografía de intercambio iónico (IEC): IEC separa los péptidos en función de su carga. La fase estacionaria en IEC es una resina con grupos funcionales cargados, ya sea catiónicos o aniónicos. La solución de péptido crudo se carga en la columna IEC, y los péptidos se eluyen usando un gradiente de un tampón con diferentes resistencias iónicas o valores de pH. Los péptidos con diferentes cargas se unirán a la resina con diferentes afinidades y eluden en diferentes momentos.
- Cromatografía de exclusión por tamaño (SEC): SEC separa los péptidos en función de su tamaño. La fase estacionaria en SEC es una resina porosa, y los péptidos se separan de acuerdo con su capacidad para ingresar a los poros de la resina. Los péptidos más grandes eluirán primero, seguidos de péptidos más pequeños. La SEC a menudo se usa como un paso de pulido después de RPC o IEC para eliminar los agregados restantes o las impurezas de bajo peso molecular.
Paso 4: Desalting
Después de la cromatografía preparativa, las fracciones peptídicas purificadas pueden contener sales y otras moléculas pequeñas de los tampones de cromatografía. La desalación es el proceso de eliminar estas sales para obtener una solución de péptido puro. Un método común para la desalación es la diálisis, donde la solución de péptido se coloca en una bolsa de diálisis con una membrana semipermeable y se dializa contra un tampón con una concentración de sal baja. Otro método es la cromatografía de filtración de gel, que puede separar el péptido de las sales en función de sus diferencias de tamaño.
Paso 5: liofilización
La liofilización, también conocida como liofilización, es el paso final en el proceso de purificación. Implica congelar la solución de péptido purificada y luego eliminar el agua por sublimación al vacío. La liofilización no solo elimina el agua de la solución de péptidos, sino que también estabiliza el péptido evitando la degradación y el crecimiento microbiano. El péptido liofilizado resultante es un polvo seco que se puede almacenar y transportar fácilmente.
Paso 6: Control de calidad
El control de calidad es una parte esencial del proceso de purificación de la API de péptidos. Después de la purificación y la liofilización, el péptido se analiza utilizando varias técnicas analíticas para garantizar su pureza, identidad y calidad. Algunas de las técnicas analíticas comunes utilizadas para el control de la calidad de los péptidos incluyen cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), espectrometría de masas (MS), resonancia magnética nuclear (RMN) y análisis de aminoácidos.
- Cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC): HPLC se usa para determinar la pureza del péptido separando el péptido de cualquier impureza restante y cuantificando sus cantidades. Un péptido bien purificado debe tener un solo pico afilado en el cromatograma de HPLC, lo que indica un alto nivel de pureza.
- Espectrometría de masas (MS): La MS se usa para confirmar la identidad del péptido determinando su peso molecular. El peso molecular medido del péptido debe coincidir con el peso molecular teórico calculado a partir de su secuencia de aminoácidos.
- Resonancia magnética nuclear (RMN): La RMN se usa para determinar la estructura y la conformación del péptido. Puede proporcionar información sobre el entorno químico de los residuos de aminoácidos en el péptido y ayudar a confirmar su identidad.
- Análisis de aminoácidos: El análisis de aminoácidos se usa para determinar la composición de aminoácidos del péptido. La composición de aminoácidos medida debe coincidir con la composición esperada basada en la secuencia de péptidos.
Paso 7: Embalaje y almacenamiento
Una vez que la API peptídica ha pasado las pruebas de control de calidad, está lista para el embalaje y el almacenamiento. El péptido típicamente se empaqueta en viales o ampolas estériles bajo una atmósfera de nitrógeno o argón para evitar la oxidación y la degradación. Los materiales de embalaje deben elegirse para ser compatibles con el péptido y proporcionar una buena barrera contra la humedad, el oxígeno y la luz. Las condiciones de almacenamiento para la API del péptido dependen de su estabilidad y deben controlarse cuidadosamente para garantizar su calidad a largo plazo.
Como proveedor de API de péptidos, estamos comprometidos a proporcionar a nuestros clientes API de péptidos de alta calidad que cumplan con sus requisitos específicos. Nuestras instalaciones de purificación de vanguardia y un equipo experimentado de científicos aseguran que cada lote de API de péptidos se purifique a los más altos estándares. Si está interesado en comprar API de péptidos comoPalmitoyl -glu (OSU) -OtbuoFMOC-SER (TBU) -AIB-OH, no dude en contactarnos para obtener más información y discutir sus necesidades específicas. Esperamos trabajar con usted para proporcionar las mejores soluciones de API de péptidos para su investigación y desarrollo farmacéutico.
Referencias
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. y Walter, P. (2002). Biología molecular de la célula. Ciencia de Garland.
- Jones, J. (1991). Síntesis de aminoácidos y péptidos. Oxford University Press.
- Snyder, LR, Kirkland, JJ y Glajch, JL (2010). Desarrollo práctico de métodos HPLC. John Wiley & Sons.