La transfección es una técnica crucial en la biología molecular que permite la introducción de ácidos nucleicos extraños en células, lo que permite a los investigadores estudiar la función génica, la expresión de proteínas y las vías de señalización celular. Las células TET-213, una línea celular de neuroblastoma humano, se usan comúnmente en la investigación de neurociencia debido a sus propiedades neuronales. En esta publicación de blog, compartiré algunas ideas sobre cómo transfectar las células TET-213 de manera efectiva, aprovechando mi experiencia como proveedor de células TET-213.
Comprender las células TET-213
Antes de profundizar en el proceso de transfección, es importante comprender las características de las células TET-213. Estas células se derivan de un neuroblastoma humano y exhiben características neuronales, como la capacidad de extender las neuritas y expresar marcadores neuronales. Son células adherentes que crecen bien en condiciones de cultivo celular estándar, típicamente en un medio suplementado con suero bovino fetal (FBS) y antibióticos.
Elegir el método de transfección correcto
Existen varios métodos disponibles para transfectar células, cada una con sus propias ventajas y limitaciones. La elección del método de transfección depende de varios factores, incluido el tipo de ácido nucleico a transfeccionar, el tipo de célula y la eficiencia de transfección deseada. Aquí hay algunos métodos de transfección comunes adecuados para células TET-213:
Transfección a base de lípidos
La transfección basada en lípidos es uno de los métodos más utilizados para introducir ácidos nucleicos en las células. Implica el uso de reactivos a base de lípidos que forman complejos con el ácido nucleico, que luego son absorbidos por las células a través de la endocitosis. La transfección basada en lípidos es relativamente fácil de realizar y puede lograr altas eficiencias de transfección en muchos tipos de células, incluidas las células TET-213.
Electroporación
La electroporación es un método físico que utiliza un campo eléctrico para crear poros temporales en la membrana celular, lo que permite que el ácido nucleico ingrese a las células. Este método es particularmente útil para transfectar células que son difíciles de transfectar usando otros métodos, como las células primarias. Sin embargo, la electroporación puede ser más dañina para las células y puede requerir la optimización de los parámetros de electroporación para lograr altas eficiencias de transfección.
Transducción viral
La transducción viral implica el uso de vectores virales para administrar el ácido nucleico en las células. Los vectores virales se derivan de virus que han sido diseñados para transportar el ácido nucleico deseado y pueden infectar de manera eficiente las células. La transducción viral puede lograr altas eficiencias de transfección y puede usarse para transfectar una amplia gama de tipos de células, incluidas las células TET-213. Sin embargo, la transducción viral requiere equipos y experiencia especializados, y existen posibles preocupaciones de seguridad asociadas con el uso de vectores virales.
Preparación de las células para la transfección
La preparación de células adecuada es esencial para una transfección exitosa. Aquí hay algunos pasos a seguir al preparar células TET-213 para la transfección:
Cultivo celular
Mantenga las células TET-213 en un medio de cultivo celular adecuado suplementado con FBS y antibióticos. Pase las células regularmente para mantener su fase de crecimiento exponencial. Es importante usar células sanas y de crecimiento activo para la transfección, ya que las células en un estado fisiológico deficiente pueden tener una eficiencia de transfección más bajas.
Siembra celular
Sembra las células TET-213 en una placa de cultivo o una placa múltiple a una densidad apropiada. La densidad de siembra depende del método de transfección y del tipo de experimento. Para la transfección basada en lípidos, generalmente se recomienda una densidad de siembra de 50-80% de confluencia.
Incubación celular
Incubar las células sembradas en una incubadora humidificada a 37 ° C con 5% de CO2 durante al menos 24 horas antes de la transfección para permitir que las células se unan y se recuperen del proceso de siembra.
Realización de la transfección
Una vez que se preparan las células, es hora de realizar la transfección. Aquí hay un protocolo general para la transfección basada en lípidos de las células TET-213:
Prepare el reactivo de transfección
Siga las instrucciones del fabricante para preparar el reactivo de transfección basado en lípidos. Típicamente, esto implica diluir el reactivo en un medio de transfección adecuado.
Preparar el ácido nucleico
Prepare el ácido nucleico para ser transfectado, como el ADN plasmídico o el siRNA. Diluta el ácido nucleico en un medio de transfección adecuado.
Formar el complejo de transfección
Mezcle el reactivo de transfección diluido y el ácido nucleico diluido en un tubo e incube a temperatura ambiente durante 15-30 minutos para permitir la formación del complejo de transfección.
Agregue el complejo de transfección a las células
Retire el medio de cultivo de las células y reemplácelo con medio de transfección fresca. Agregue el complejo de transfección a las celdas en cuanto a caída y gire suavemente la placa para distribuir el complejo de manera uniforme.
Incubar las células
Incubar las células transfectadas en una incubadora humidificada a 37 ° C con 5% de CO2 durante la cantidad de tiempo apropiada, dependiendo del tipo de ácido nucleico y el experimento. Para la transfección del ADN plasmídico, un tiempo de incubación de 24-48 horas es típicamente suficiente para permitir la expresión génica.
Evaluación de la eficiencia de transfección
Después de la transfección, es importante evaluar la eficiencia de la transfección para determinar si la transfección fue exitosa. Existen varios métodos disponibles para evaluar la eficiencia de la transfección, que incluyen:
Microscopía de fluorescencia
Si el ácido nucleico transfectado codifica una proteína fluorescente, como GFP, la microscopía de fluorescencia se puede usar para visualizar las células transfectadas. El porcentaje de células fluorescentes se puede utilizar como una estimación de la eficiencia de transfección.
Citometría de flujo
La citometría de flujo se puede usar para cuantificar el porcentaje de células transfectadas en función de la expresión de un marcador fluorescente o un antígeno de superficie celular. Este método proporciona una medida más precisa y cuantitativa de la eficiencia de transfección en comparación con la microscopía de fluorescencia.
Transferencia Western o QPCR
Si el ácido nucleico transfectado codifica una proteína de interés, la transferencia Western o QPCR se pueden usar para detectar la expresión de la proteína a nivel de proteína o ARNm, respectivamente. Este método puede proporcionar información sobre el nivel de expresión génica y la funcionalidad de la proteína transfectada.
Solución de problemas de problemas de transfección comunes
La transfección a veces puede ser desafiante, y hay varios problemas comunes que pueden ocurrir. Aquí hay algunos consejos de solución de problemas para problemas de transfección comunes:
Baja eficiencia de transfección
- Verifique la calidad y cantidad del ácido nucleico. Asegúrese de que el ácido nucleico sea puro y de alta calidad.
- Optimice las condiciones de transfección, como la concentración de reactivo de transfección, la relación ácido a reagente nucleico y el tiempo de incubación.
- Verifique la salud y la viabilidad celular. Asegúrese de que las células estén sanas y crecen activamente antes de la transfección.
- Pruebe un método o reactivo de transfección diferente.
Toxicidad celular
- Reduzca la concentración del reactivo de transfección o el ácido nucleico.
- Optimizar las condiciones de transfección para minimizar el daño celular.
- Use un método o reactivo de transfección diferente que sea menos tóxico para las células.
Eficiencia de transfección variable
- Asegúrese de que las células se sembraran uniformemente y a la densidad apropiada.
- Mezcle el complejo de transfección a fondo antes de agregarlo a las células.
- Incubar las células en condiciones consistentes para minimizar la variabilidad.
Conclusión
La transfección de células TET-213 puede ser un proceso desafiante pero gratificante. Al elegir el método de transfección correcta, preparar las células correctamente y seguir el protocolo apropiado, puede lograr altas eficiencias de transfección y obtener resultados confiables. Si tiene alguna pregunta o necesita más ayuda con la transfección de células TET-213, no dude en contactarnos. Somos un proveedor líder de células TET-213 y podemos proporcionarle células de alta calidad, reactivos de transfección y soporte técnico.
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Referencias
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