En el ámbito de la investigación y el desarrollo de péptidos, la pureza de los péptidos de catálogo es de suma importancia. Como proveedor dedicado de péptidos de catálogo, entendemos la importancia de proporcionar productos de alta calidad a nuestros clientes. A veces, a pesar de nuestros mejores esfuerzos en los procesos iniciales de síntesis y purificación, puede haber una mayor purificación de los péptidos de catálogo. En este blog, exploraremos varios métodos y consideraciones para purificar aún más los péptidos de catálogo cuando sea necesario.
¿Por qué más purificación?
Hay varias razones por las cuales podría ser necesaria una mayor purificación de los péptidos de catálogo. En primer lugar, en aplicaciones de investigación altamente sensibles, como ensayos basados en células, estudios in vivo o investigación de biología estructural, incluso las cantidades de impurezas pueden tener un impacto significativo en los resultados experimentales. Las impurezas podrían interferir potencialmente con la actividad biológica del péptido, lo que lleva a falsos positivos o negativos.
En segundo lugar, los requisitos regulatorios en algunas industrias, como los productos farmacéuticos, exigen un nivel muy alto de pureza para los péptidos utilizados en el desarrollo de fármacos. Si un péptido se considera como un agente terapéutico potencial, cualquier impureza podría presentar riesgos para la seguridad del paciente y, por lo tanto, son esenciales pasos de purificación adicionales.
Métodos cromatográficos
Cromatografía líquida de alto rendimiento invertida (RP - HPLC)
RP - HPLC es uno de los métodos más utilizados para la purificación de péptidos. Separa péptidos según su hidrofobicidad. La fase estacionaria en RP - HPLC es un material hidrofóbico, típicamente una columna basada en sílice con cadenas de alquilo unidas (p. Ej., C18 o C8). Los péptidos con diferentes hidrofobicidades interactuarán de manera diferente con la fase estacionaria, lo que dará como resultado diferentes tiempos de retención.
Para purificar aún más los péptidos de catálogo usando RP - HPLC, primero debemos seleccionar una fase móvil apropiada. Una fase móvil común consiste en una mezcla de agua y un disolvente orgánico como acetonitrilo o metanol, con la adición de una pequeña cantidad de ácido (p. Ej., Ácido trifluoroacético, TFA) para mejorar la forma máxima. Al ajustar el gradiente del solvente orgánico, podemos optimizar la separación del péptido objetivo de las impurezas.
Por ejemplo, si tenemos un péptido de catálogo comoLL-37, péptido antimicrobiano, que es un péptido antimicrobiano con aplicaciones terapéuticas potenciales, RP - HPLC puede usarse para eliminar cualquier síntesis restante por productos o fragmentos degradados. El LL - 37 purificado se puede usar en ensayos de actividad antimicrobianos más precisos.
Ion - cromatografía de intercambio
Ion: la cromatografía de intercambio separa los péptidos según su carga. Hay dos tipos principales: catión - cromatografía de intercambio (CEX) y cromatografía de intercambio aniónico (AEX). En CEX, la fase estacionaria tiene un grupo cargado negativamente, y los péptidos con una carga positiva neta se unirán a ella. En AEX, la fase estacionaria se carga positivamente, y se conservarán péptidos con carga negativa.
La elección entre CEX y AEX depende del punto isoeléctrico (PI) del péptido. Si el PI del péptido está por debajo del pH de la fase móvil, el péptido tendrá una carga negativa neta y se puede usar AEX. Por el contrario, si el PI está por encima del pH de la fase móvil, CEX es más apropiado.
Por ejemplo,Ureibatachykinin II, un péptido con un perfil de carga específico puede purificarse aún más utilizando la cromatografía de intercambio ion. Al seleccionar cuidadosamente el pH de la fase móvil y la fuerza iónica, podemos lograr una buena separación del péptido objetivo de otras impurezas cargadas.
Métodos electroforéticos
Dodecil sulfato de sodio - electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS - Página)
Aunque la página SDS se usa principalmente para el análisis de proteínas, también se puede aplicar a la purificación de péptidos hasta cierto punto. En la página SDS, los péptidos son desnaturalizados por SDS y se separan según su peso molecular. Los péptidos migran a través de un gel de poliacrilamida bajo la influencia de un campo eléctrico.
Después de la electroforesis, el gel puede mancharse para visualizar los péptidos. La banda correspondiente al péptido objetivo se puede extirpar del gel, y el péptido se puede eluir de la matriz de gel. Sin embargo, este método tiene algunas limitaciones. El proceso de elución puede ser complejo, y puede haber alguna pérdida de péptido durante la purificación. Además, SDS puede ser difícil de eliminar por completo del péptido purificado.
Electroforesis capilar (CE)
La electroforesis capilar es una poderosa técnica de separación para los péptidos. Ofrece alta eficiencia de separación, tiempo de análisis corto y bajo consumo de muestra. CE separa los péptidos en función de su relación de masa de carga a -. Existen diferentes modos de CE, como electroforesis de zona capilar (CZE), electroforesis en gel capilar (CGE) y cromatografía electroquinética micelar (MEKC).
CZE es el modo más utilizado para el análisis y la purificación de péptidos. En CZE, los péptidos se separan en un capilar lleno de tampón debajo de un campo eléctrico. La separación se basa en las diferencias en la movilidad electroforética de los péptidos. CE puede acoplarse con varios métodos de detección, como la absorción UV, la fluorescencia y la espectrometría de masas, para mejorar la precisión de la identificación y purificación de péptidos.
Otras consideraciones
Solubilidad
La solubilidad del péptido es un factor importante en el proceso de purificación. Si un péptido tiene poca solubilidad en los solventes de purificación, puede conducir a la precipitación durante la purificación, lo que afectará la recuperación y la pureza del péptido. Para mejorar la solubilidad de los péptidos, podemos ajustar el pH del solvente, agregar co -disolventes o usar agentes solubilizantes específicos.
Análisis de pureza
Después de una purificación adicional, es crucial analizar la pureza del péptido. Los métodos comunes para el análisis de pureza incluyen cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), espectrometría de masas (MS) y resonancia magnética nuclear (RMN). HPLC puede proporcionar información sobre la pureza cromatográfica del péptido, mientras que MS puede confirmar el peso molecular del péptido y detectar cualquier impureza con diferentes masas. La RMN se puede usar para determinar la estructura y la pureza del péptido a nivel atómico.
Conclusión
Como proveedor de péptidos de catálogo, estamos comprometidos a proporcionar péptidos de alta calidad a nuestros clientes. Cuando se necesita una purificación adicional de los péptidos de catálogo, tenemos una variedad de métodos a nuestra disposición, incluidos métodos cromatográficos, métodos electroforéticos y otras consideraciones, como la solubilidad y el análisis de pureza. Al seleccionar cuidadosamente el método de purificación apropiado y optimizar las condiciones de purificación, podemos asegurar que los péptidos cumplan con los requisitos de alta pureza de nuestros clientes.
Si tiene alguna necesidad de péptidos de catálogo o requiere servicios de purificación adicionales, no dude en contactarnos para obtener la adquisición y la discusión. Esperamos trabajar con usted para satisfacer sus necesidades de investigación y desarrollo de péptidos.
Referencias
- Snyder, LR, Kirkland, JJ y Dolan, JW (2010). Introducción a la cromatografía líquida moderna. Wiley.
- Jorgenson, JW y Lukacs, KD (1981). Electroforesis de zona capilar. Analítica Química, 53 (8), 1298 - 1302.
- Laemmli, Reino Unido (1970). Escisión de proteínas estructurales durante el ensamblaje de la cabeza del bacteriófago T4. Nature, 227 (5259), 680 - 685.